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导读:
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空间转录如何实现空间信息获取
空间转录组数据分析的核心流程包括数据获取与预处理、聚类与空间定位、结合组织区域与病理学特征挖掘信息,以及联合单细胞RNA测序解析细胞类型空间位置信息。具体如下:数据获取与预处理核心任务:获得测序数据后,需对图像进行处理、数据比对和Barcode处理,以获取每个芯片上每个spot的基因表达信息。
核心步骤拆解 第一步:捕获单细胞信息——用微流控或激光显微切割技术分离单个细胞,保留其RNA(遗传活动信号)。 第二步:标记空间坐标——通过特殊玻片或荧光探针,给每个细胞所在位置打上“条形码”(例如网格坐标)。
原位杂交:通过化学或荧光信号标记能够与特定转录本特异性结合的探针序列,在杂交后检测探针上的化学或荧光信号,利用成像技术获得基因的空间表达信息。如smFISH、MERFISH和Nanostring CosMx SMI等技术。
定位分析 定位分析重点是可视化,通过基因可视化体现特征基因的空间信息,实现细胞可视化,得到更高分辨率的细胞空间图谱。基因和细胞在空间上的可视化结合,进一步确定了基因与细胞之间的关系,为深入数据挖掘做好准备,这也是空间图谱的重要意义。图2 图谱研究的三个方向小结图谱型文章具有简单、全面的特点。
通过数据分析,可以获得包含精确空间位置信息的转录组数据。这些数据为研究细胞在组织中的分布、功能以及相互作用提供了重要依据。以基于微阵列的空间转录组测序技术为例: 载玻片上排列着大量的捕获探针,这些探针能够特异性结合特定的RNA分子。
测序后,根据数据的条形码信息对数据进行分配,确定其来源位置,最终实现空间基因表达的可视化。实验流程 Visium空间转录组技术的实验流程包括:组织切片:对新鲜冷冻组织或FFPE组织进行切片,并将其放置在文库制备玻片上。固定与染色:对组织进行固定,并通过HE或免疫荧光(IF)染色进行成像。


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