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空间转录如何实现空间信息获取
原位杂交:通过化学或荧光信号标记能够与特定转录本特异性结合的探针序列,在杂交后检测探针上的化学或荧光信号,利用成像技术获得基因的空间表达信息。如smFISH、MERFISH和Nanostring CosMx SMI等技术。
核心步骤拆解 第一步:捕获单细胞信息——用微流控或激光显微切割技术分离单个细胞,保留其RNA(遗传活动信号)。 第二步:标记空间坐标——通过特殊玻片或荧光探针,给每个细胞所在位置打上“条形码”(例如网格坐标)。
在空间转录组测序过程中,首先对组织样本进行细致的切片处理,并确保每个切片都得到妥善固定。接着,运用原位杂交或基于微阵列的策略捕获并标记组织切片中的RNA分子,确保每个位置的RNA能够被精确识别。
空间信息重构技术提供了获取空间位置的另一种思考方式,尽管分辨率较低,但仍为实际问题提供了实用的解决方案。在实际应用中,需要根据研究目的、样本类型、成本预算等因素综合考虑选择合适的空间转录组技术。
通过数据分析,可以获得包含精确空间位置信息的转录组数据。这些数据为研究细胞在组织中的分布、功能以及相互作用提供了重要依据。以基于微阵列的空间转录组测序技术为例: 载玻片上排列着大量的捕获探针,这些探针能够特异性结合特定的RNA分子。
测序后,根据数据的条形码信息对数据进行分配,确定其来源位置,最终实现空间基因表达的可视化。实验流程 Visium空间转录组技术的实验流程包括:组织切片:对新鲜冷冻组织或FFPE组织进行切片,并将其放置在文库制备玻片上。固定与染色:对组织进行固定,并通过HE或免疫荧光(IF)染色进行成像。


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